、目的要求

1．了解高壓蒸汽滅菌的基本原理及應(yīng)用范圍。

2．學(xué)習(xí)高壓蒸汽滅菌的操作方法。

二、基本原理

高壓蒸汽滅菌是將滅菌過的物品放置在封閉的高壓蒸汽滅菌鍋中，通過加熱，使滅菌鍋在鍋之間沸騰產(chǎn)生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內(nèi)的冷空氣從排氣閥中驅(qū)盡，然后關(guān)閉排氣閥繼續(xù)加熱，這時因為蒸汽不能溢出，并且增加了滅菌器內(nèi)的壓力，從而使沸點增高，獲得高于100℃的溫度。導(dǎo)致細菌蛋白凝固變性，達到滅菌的目的。

在使用上海申安高壓蒸汽滅菌鍋滅菌時，滅菌鍋內(nèi)冷空氣的排除是否完全極為重要，因為空氣的膨脹壓大于水蒸汽的膨脹壓，所以，當水蒸汽中含有空氣時，在同壓力下，含空氣蒸汽的溫度低于飽和蒸汽的溫度。

實驗室中常用的高壓蒸汽滅菌鍋有立式、臥式和手提式等幾種，本實驗介紹手提式高壓蒸汽滅菌鍋的使用方法。

三、器材

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，培養(yǎng)皿（6套包），手提式高壓蒸汽菌鍋等。

四、操作步驟

1．先將內(nèi)層滅菌桶取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。

2．放回滅菌桶，并裝入待滅菌物品。注意不要裝得太擠，以免防礙蒸汽流通而影響滅菌效果。三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。

3．加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)。再以兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺栓，使螺栓松緊致，勿使漏氣。

4．用電爐或煤氣加熱，并同時打開排氣閥，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷空氣。待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時，控制熱源，維持壓力至所需時間。本實驗用 1．05kg/cm2 ，121．3℃，20分鐘滅菌。

5．滅菌所需時間到后，切斷電源或關(guān)閉煤氣，讓上海申安滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當壓力表的壓力降至0時，打開排氣閥，旋松螺栓，打開蓋子，取出滅菌物品。如果壓力未降到0時，打開排氣閥，就會因鍋內(nèi)壓力突然下降，使容器內(nèi)的培養(yǎng)基由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養(yǎng)基而發(fā)生污染。

6．將取出的滅菌培養(yǎng)基放入 37℃溫箱培養(yǎng)24小時，經(jīng)檢查若無雜菌生長，即可待用。

五、實驗報告

1．結(jié)果

檢查培養(yǎng)基滅菌是否徹底。

2．思考題

（1）高壓蒸汽滅菌開始之前，為什么要將鍋內(nèi)冷空氣排盡？滅菌完畢后，為什么要待壓力降到0時才能打開排氣閥，開蓋取物？

（2）在使用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌時，怎樣杜絕切不安全的因素？

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